Diagnosis herpes

Diagnosis herpes didasarkan pada isolasi virus klasik pada kultur sel sensitif, metode imunofluoresensi dan serologis, pemeriksaan kolposkopi, dan penggunaan metode biologi molekuler modern (PCR, hibridisasi titik), yang memungkinkan diagnosis seluruh kelompok virus herpes, termasuk tipe HHV-6 dan HHV-7.

Metode diagnostik laboratorium untuk infeksi herpes

Metode utama yang bertujuan untuk mengisolasi HSV atau mendeteksi partikel virus dan/atau komponennya	Metode tambahan yang bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap HSV dalam cairan biologis tubuh manusia
Isolasi HSV dalam kultur sel dan hewan yang sensitif Mikroskop elektron langsung dan imun Varian langsung dan tidak langsung dari IPA JIKA Metode biologi molekular Reaksi aglutinasi lateks	Reaksi netralisasi RSC Penentuan antibodi terhadap protein non-struktural HSV-1,2

Telah ditunjukkan bahwa pada 76% pasien herpes genital (GH) disebabkan oleh HSV-2, dan pada 24% - oleh tipe HSV-1. Selain itu, GH sebagai monoinfeksi hanya terjadi pada 22% pasien, pada 78% kasus asosiasi mikroba terdeteksi. Pada 46% individu, parasitocenosis yang disebabkan oleh dua patogen terdeteksi, termasuk klamidia yang terdeteksi pada 40% kasus. Gardnerella, Trichomonas, dan gonococci lebih jarang terdeteksi pada apusan.

Pada 27% pasien, parasitocenosis diwakili oleh tiga patogen, pada 5,2% - oleh empat patogen. Selain itu, kombinasi klamidia dengan jamur gardnerella dan Candida paling sering ditemukan. Data ini memperkuat perlunya pemeriksaan bakteriologis menyeluruh pada pasien dengan GH untuk mengidentifikasi kombinasi agen patogen, serta studi mendalam tentang patogenesis infeksi campuran pada saluran urogenital, yang akan memungkinkan terapi kompleks yang berbeda untuk infeksi herpes.

Bahan yang dipelajari untuk isolasi HSV tergantung pada lokalisasi lesi herpes

Lokalisasi lesi	Isi vesikel	Pengikisan sel				Cairan serebrospinal (CSF)	Aspirasi bronkial	Biopsi	Darah
		1	2	3	4
Kulit	+								+
Mata			+						+
Alat kelamin				+					+
Dubur	+				+				+
Mulut	+	+							+
Sistem Saraf Pusat (SSP)	+					+		+	+
Paru-paru		+					+		+
Hati								+	+
Herpes kongenital	+	+	+				+		+

Metode diagnostik laboratorium infeksi sitomegalovirus

Metode	Waktu yang dibutuhkan untuk mendapatkan hasil	Catatan
VIROLOGI
Mikroskop elektron	3 jam	Tidak terlalu mudah diakses
Isolasi virus dalam kultur sel (VCI)	4-20 hari	Standar, Lambat
Pewarnaan imunofluoresensi AG awal menggunakan antibodi monoklonal	6 jam	Kurang spesifik
SITOLOGI	2-3 jam	Kurang spesifik
SEROLOGI
RSC	2 hari	Standar
Bahasa Inggris RGA	1 hari	Padat karya
TERUMBU KARANG	6 jam	Sederhana, spesifik
NRIF	6 jam	Sulit
RIM	6 jam	Sulit
ELISA (IgM, DO)	6 jam	Cepat, sederhana
Imunoblot	6 jam	Mahal
BIOLOGI MOLEKULER
MG	5-7 hari	Mahal dan padat karya
PCR	3 jam	Mahal

Metode diagnostik virus herpes zoster

Metode diagnostik	Teknik laboratorium
TIDAK LANGSUNG
Pilihan	Kultur jaringan, embrio ayam, hewan laboratorium, kultur bersama dengan sel permisif atau virus pembantu
Identifikasi isolat	Reaksi netralisasi, RSC, IF, PIEF, reaksi presipitasi isolat, aglutinasi, IF
LANGSUNG
Sitologi	Apusan: imunofluoresensi warna
Histologi	Patomorfologi sel
Struktur	Mikroskopi embrionik, mikroskopi imunoelektron
Penentuan antigen	JIKA, PIEF, RIM, IFA
Penentuan produksi antibodi lokal	Ig M, Ig G, Ig A: ELISA, RIA
Pendekatan biologi molekular	Hibridisasi molekuler, PCR

Diagnostik laboratorium infeksi yang disebabkan oleh virus herpes zoster

Masalah diagnostik	Metode	Hasil yang diharapkan
Infeksi primer akut	1	Deteksi dalam 2 jam
	2	Tingkat antibodi meningkat secara perlahan
	3	Hadir 3 hari setelah infeksi
Infeksi reaktif akut	1	Deteksi UUU setelah 2 jam
	2	Tingkat antibodi meningkat secara perlahan
	4	Hadir 4 hari setelah ruam muncul

1. penentuan vesikel VEGF dalam cairan;
2. serologi: CSC, ELISA, bertujuan untuk mendeteksi
3. serologi: ELISA bertujuan untuk mendeteksi IgM;
4. serologi: ELISA ditujukan untuk mendeteksi IgA, IgM.

Metode untuk menunjukkan respon imun terhadap infeksi virus herpes zoster

Mendekati	Metode
Deteksi peningkatan titer antibodi pada serum kedua	RSK, RTGA, RPGA, reaksi netralisasi IF, RIM, ELISA
Deteksi antibodi spesifik kelas Ig G, Ig A pada sampel serum pertama	ELISA, IF, RIM, aglutinasi lateks

Interpretasi hasil pemeriksaan serologis serum pasien untuk infeksi virus herpes (ELISA)

Nama infeksi/penanda	Nilai ambang batas rata-rata untuk infeksi
	Hasil Analisis	Interpretasi
Sitomegaly Anti-CMV IgG (1-20 U/ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positif 1-6 Positif 6-10 Positif >10 Negatif Positif 100-300 Negatif <90 Diragukan 90-100	Remisi Eksaserbasi penyakit Fase akut penyakit Tidak ada infeksi (penyakit) Fase akut penyakit Ulangi analisis dalam 2-3 minggu
Herpes simpleks 1,2 serotipe Anti-HSV 1/2 total (100-900%)	Positif 100-400 Positif 400-800 Positif >800 Negatif <100	Remisi Eksaserbasi penyakit Fase akut penyakit Tidak ada infeksi (penyakit)

Tabel ini menyajikan metode utama diagnostik laboratorium infeksi virus herpes, serta bahan biologis yang direkomendasikan untuk diperiksa saat mengisolasi HSV, dengan mempertimbangkan lokalisasi lesi herpes.

Isolasi virus herpes simpleks dan CMV yang andal dengan menginfeksi kultur sel yang sensitif. Jadi, selama pemeriksaan virologi terhadap 26 pasien selama periode kambuh, HSV diisolasi pada kultur sel Vero yang sensitif dalam 23 kasus (88,4%). Kultur yang terinfeksi menunjukkan gambaran aksi sitopatik yang khas untuk HSV - pembentukan sel raksasa berinti banyak atau akumulasi sel bulat dan membesar dalam bentuk kelompok. Dalam 52,1% kasus, fokus aksi sitopatik virus dapat dideteksi sedini 16-24 jam setelah infeksi. Pada 48-72 jam inkubasi kultur yang terinfeksi, persentase bahan yang menyebabkan kerusakan sel tertentu meningkat menjadi 87%. Dan hanya dalam 13% kasus hasil positif terdeteksi 96 jam setelah infeksi atau lebih atau selama penularan berulang.

Metode diagnostik laboratorium infeksi herpes umum

Metode utama yang bertujuan untuk mendeteksi (mengisolasi) virus herpes, partikelnya dan komponennya	Metode bantu yang bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus herpes dalam cairan biologis, mendeteksi pergeseran enzimatik dalam serum darah
Isolasi virus herpes pada kultur sel dan hewan yang sensitif Mikroskopi elektron langsung dan imun Varian langsung dan tidak langsung dari metode imunoperoksidase Varian langsung dan tidak langsung dari metode antibodi fluoresensi Varian immunoassay enzim fase padat Varian metode hibridisasi molekuler (DNA-DNA) Reaksi rantai polimerase Reaksi aglutinasi lateks	Uji netralisasi Uji fiksasi komplemen Uji aglutinasi lateks Versi tidak langsung dari metode antibodi fluoresensi Versi tidak langsung dari metode imunoperoksidase Varian imunoasai enzim fase padat Metode imunoblotting Metode fiksasi komplemen radial Penentuan kadar alanin dan aspartat aminotransferase

Metode serologis digunakan untuk mendiagnosis mononukleosis infeksius (infeksi yang disebabkan oleh EBV). Reaksi Paul-Bunnell dengan sel darah merah domba jantan, titer diagnostik 1:28 atau lebih tinggi dalam satu kali uji serum darah, atau peningkatan antibodi sebanyak 4 kali lipat saat memeriksa serum berpasangan. Reaksi Hoff-Bauer dengan suspensi 4% sel darah merah kuda yang diformalin digunakan. Hasilnya diperhitungkan setelah 2 menit; pada mononukleosis infeksius, reaksinya sangat spesifik.

Saat ini, metode immunoassay enzim (EIA) untuk mendiagnosis mononukleosis infeksiosa sedang dikembangkan. Dalam kasus ini, antibodi IgG dan IgM dalam serum pasien ditentukan dengan menginkubasinya dengan limfoblas yang terinfeksi EBV, diikuti dengan pengobatan dengan antibodi fluoresens. Pada periode akut penyakit, antibodi terhadap antigen kapsid virus ditentukan dalam titer 1:160 dan lebih tinggi.

Bila menggunakan sejumlah sistem uji komersial impor, ELISA dapat mendeteksi: antibodi terhadap antibodi selubung EBV, antibodi terhadap antigen awal EBV, total antibodi terhadap antigen awal EBV, yang ditentukan pada fase akut penyakit baik di dalam nukleus maupun di dalam sitoplasma sel, dan antibodi terbatas terhadap EBV awal, yang ditentukan pada fase akut penyakit baik di dalam nukleus maupun di dalam sitoplasma sel, antibodi terbatas terhadap antigen awal EBV, yang ditentukan pada puncak penyakit hanya di dalam sitoplasma sel, dan antibodi terhadap antigen inti EBV. Penggunaan sistem uji ini memungkinkan diagnostik diferensial sejumlah penyakit yang terkait dengan EBV.

Setelah uji ELISA positif yang menunjukkan antibodi terhadap EBV, reaksi imunoblotting konfirmasi dilakukan, yang menentukan keberadaan antibodi terhadap protein penanda EBV individual (protein-p): p23, p54, p72 (keberadaan protein ini menunjukkan kemungkinan reproduksi EBV), p 138. Metode laboratorium di atas juga digunakan untuk memantau efektivitas pengobatan.

Sensitivitas metode virologi adalah 85-100%, spesifisitasnya 100%, waktu penelitiannya 2-5 hari. Metode imunofluoresensi langsung (DIF) dengan antibodi poliklonal atau monoklonal terhadap HSV-1 dan HSV-2 sering digunakan dalam pekerjaan praktis. Metode DIF cukup mudah direproduksi di laboratorium klinis biasa, tidak mahal, sensitivitasnya di atas 80%, spesifisitasnya 90-95%. Mikroskopi imunofluoresensi mengungkapkan adanya inklusi sitoplasma, ciri morfologi, persentase sel yang terinfeksi pada apusan-kerokan dari uretra, saluran serviks, serviks, rektum.

Metode PIF memberikan gambaran tentang sifat morfologi sel dan perubahan lokalisasi antigen HSV. Selain tanda-tanda langsung kerusakan sel oleh virus herpes (deteksi pendaran cahaya tertentu), ada tanda-tanda tidak langsung infeksi herpes menurut data PIF:

• agregasi materi inti, pelepasan kariolema;
• adanya apa yang disebut inti “lubang”, ketika hanya satu kariolema yang tersisa dari inti sel;
• adanya inklusi intranuklear - badan Cowdry.

Saat melakukan PIF, dokter tidak hanya menerima penilaian kualitatif tetapi juga kuantitatif tentang keadaan sel yang terinfeksi, yang kami gunakan untuk menilai efektivitas terapi antivirus dengan asiklovir (AC). Dengan demikian, 80 pasien dengan herpes genital sederhana (GH) diperiksa menggunakan metode PIF secara dinamis. Ditunjukkan bahwa jika sebelum pengobatan dengan asiklovir, 88% pasien memiliki persentase sel yang terinfeksi yang tinggi (50-75% dan lebih tinggi) dalam apusan, maka setelah satu kali pemberian asiklovir, sel-sel sehat terdeteksi dalam apusan 44% pasien, dalam 31% kasus, sel-sel yang terinfeksi tunggal dicatat, dan pada 25% pasien terdapat hingga 10% sel yang terinfeksi.

Kandungan sel yang terinfeksi pada apusan (reaksi PIF) pasien herpes genital yang diobati dengan asiklovir

Periode sakit	Persentase kandungan dalam apusan
	Sel yang terinfeksi					Sel normal
	Lebih dari 75%	50-75%	40-50%	10%	Sel tunggal di bidang pandang
Kambuh (sebelum pengobatan)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisi (setelah pengobatan)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Dengan menggunakan PIF dan metode hibridisasi titik selama bertahun-tahun, telah dicatat bahwa hasil penelitian bertepatan dalam hampir 100% kasus. Perlu dicatat bahwa untuk meningkatkan keandalan diagnosis herpes, terutama dalam kasus herpes subklinis dan bentuk herpes yang bermanifestasi rendah, disarankan untuk menggunakan 2-3 metode diagnostik laboratorium dalam pekerjaan, terutama ketika memeriksa wanita hamil, wanita dengan riwayat obstetrik yang tidak menguntungkan, dan orang dengan diagnosis ginekologis yang tidak ditentukan.

Dengan demikian, dalam diagnostik PCR infeksi virus dan bakteri pada saluran urogenital, perlu untuk mengevaluasi hasil positif yang diperoleh dengan mempertimbangkan anamnesis, ada (atau tidak adanya) gejala klinis spesifik penyakit tersebut. Jika klamidia terdeteksi menggunakan PCR, maka dalam kasus ini ada kemungkinan besar infeksi dan masalah terapi dapat diselesaikan sebagaimana mestinya. Dalam kasus deteksi mikoplasma (ureaplasma), yang merupakan mikroorganisme oportunistik, studi kultur tambahan diperlukan untuk memastikan diagnosis, yaitu menabur bahan dari pasien pada kultur sel yang sensitif. Hanya jika hasil positif diperoleh dalam analisis kultur, kita dapat berbicara tentang konfirmasi laboratorium atas diagnosis mikoplasmosis. Metode yang sama akan memungkinkan, jika perlu, untuk menentukan sensitivitas mikoplasma yang diisolasi terhadap bentuk sediaan yang sering digunakan (antibiotik, fluorokuinolon, dll.).

Infeksi simultan dengan beberapa virus dari famili Herpesviridae mungkin terjadi. Kami sering mendeteksi infeksi satu pasien dengan virus HSV-1, HSV-2, dan CMV. Pasien dengan manifestasi klinis dan laboratorium IDS sekunder (pasien onkohematologi, onkologi, terinfeksi HIV) secara signifikan lebih sering terinfeksi beberapa virus herpes. Dengan demikian, telah ditunjukkan bahwa kelainan klinis dan imunologi yang berkembang pada infeksi HIV disertai dengan peningkatan jumlah virus herpes yang dideteksi dengan metode hibridisasi molekuler. Dalam kasus ini, yang paling signifikan secara prognostik dapat dianggap sebagai deteksi simultan kompleks dari DNA tipe HSV-1, CMV, dan HHV-6.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]