Karyotyping

Untuk studi kromosom, kultur darah jangka pendek sering digunakan, begitu pula sel sumsum tulang dan kultur fibroblast. Darah yang dikirim ke laboratorium dengan antikoagulan dikenai sentrifugasi untuk pengendapan sel darah merah, dan leukosit diinkubasi dalam media kultur selama 2-3 hari. Phytohemagglutinin ditambahkan ke sampel darah, karena mempercepat aglutinasi eritrosit dan merangsang pembelahan limfosit. Fase yang paling cocok untuk studi kromosom adalah metafase mitosis, jadi colchicine digunakan untuk menghentikan pembagian limfosit pada tahap ini. Menambahkan obat ini pada kultur menyebabkan peningkatan proporsi sel yang berada dalam metafase, yaitu pada tahap siklus sel, saat kromosom paling baik dilihat. Setiap kromosom bereplikasi (menghasilkan salinannya sendiri) dan setelah pewarnaan yang tepat terlihat dalam bentuk dua kromatid yang menempel pada sentromer atau penyempitan sentral. Sel kemudian diobati dengan larutan natrium klorida hipotonik, tetap dan bernoda.

Untuk mewarnai kromosom, pewarna Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomine atau 2% acetazarine lebih sering digunakan. Mereka menodai kromosom seluruhnya, seragam (metode rutin) dan dapat digunakan untuk mengidentifikasi anomali numerik kromosom manusia.

Untuk mendapatkan gambaran rinci tentang struktur kromosom, identifikasi (identifikasi) kromosom individu atau segmennya, berbagai metode pewarnaan diferensial digunakan. Metode yang paling umum digunakan adalah Giemsa, dan juga G-and Q-bending. Pemeriksaan mikroskopis obat sepanjang kromosom menunjukkan rangkaian pita (heterochromatin) dan tidak dicat (euchromatin). Karakter striasi melintang yang diperoleh dalam kasus ini memungkinkan seseorang untuk mengidentifikasi setiap kromosom di lokasi syuting, karena garis bergantian dan ukurannya sangat individual dan konstan untuk masing-masing pasangan.

Pelat metafase dari sel individu difoto. Kromosom individu dipotong dari foto dan disisipkan pada selembar kertas secara berurutan; Gambar kromosom semacam itu disebut kariotipe.

Penggunaan pewarnaan tambahan, serta metode baru untuk mendapatkan sediaan kromosom, yang memungkinkan peregangan kromosom panjang, secara signifikan meningkatkan akurasi diagnostik sitogenetik.

Sebuah nomenklatur khusus telah dikembangkan untuk menggambarkan kariotipe manusia. Watyotype normal pria dan wanita masing-masing ditetapkan 46, XY dan 46, XX. Pada sindrom Down, ditandai dengan adanya kromosom 21 tambahan (trisomi 21), kariotipe wanita digambarkan sebagai 47, XX 21+, dan pria - 47, XY, 21+. Dengan adanya anomali struktural kromosom, perlu untuk menunjukkan lengan panjang atau pendek yang berubah: huruf p menunjukkan lengan pendek, lengan panjang, dan t translokasi. Jadi, ketika lengan pendek kromosom 5 (sindrom "cat-scream") dihapus, kariotipe wanita digambarkan sebagai 46, XX, 5p-. Ibu seorang anak dengan translokasi Sindrom Down - pembawa translokasi seimbang 14/21 memiliki kariotipe 45, XX, t (14q; 21q). Kromosom translokasi terbentuk saat lengan panjang kromosom 14 dan 21 bergabung, bahu pendek hilang.

Masing-masing bahu dibagi ke dalam distrik, dan pada gilirannya - menjadi segmen, dan yang lain ditentukan oleh angka Arab. Sentromer kromosom adalah titik awal penghitungan daerah dan segmen.

Dengan demikian, empat spidol digunakan untuk topografi kromosom: nomor kromosom, simbol bahu, nomor kabupaten dan nomor segmen di wilayah tertentu. Misalnya, catatan 6p21.3 berarti bahwa itu adalah kromosom pasangan ke-6, lengan pendeknya, wilayah 21, segmen 3. Ada simbol tambahan, khususnya pter - ujung lengan pendek, qter - ujung lengan panjang.

Metode penelitian cytogenetic memungkinkan untuk mendeteksi penghapusan dan perubahan lain dalam kromosom hanya dalam ukuran sekitar 1 juta basis (nukleotida).

[1], [2], [3], [4]