Imunofenotipe hemoblastosis

Kemajuan signifikan dalam penelitian hematologi dalam beberapa tahun terakhir dikaitkan dengan penggunaan metode imunologi modern dan cara otomatis untuk menganalisis dan memilah sel darah tepi dan sumsum tulang - flow cytometer. Studi morfologi dan sitokimia tradisional dari sel substrat penyakit (darah, sumsum tulang merah, kelenjar getah bening, limpa, dll.) dalam banyak kasus, terutama pada penyakit limfoproliferatif, tidak memungkinkan kita untuk mengidentifikasi berbagai varian di antara bentuk-bentuk yang secara morfologis mirip dan menetapkan sumber asal klon patologis. Masalah-masalah ini dapat dipecahkan hanya dengan mempelajari karakteristik imunologi sel. Setiap tahap diferensiasi sel hematopoietik sesuai dengan rangkaian antigennya sendiri, yang menurut klasifikasi internasional disebut diferensiasi dan dibagi menjadi kelompok diferensiasi, yang disebut CD.

Pada perubahan neoplastik, blok diferensiasi dapat terjadi pada setiap tahap perkembangan sel normal, yang mengakibatkan terbentuknya klon sel patologis yang menentukan substrat penyakit dan memiliki karakteristik imunologis (atau fenotipik) yang sama. Dengan melakukan studi penanda ini pada sel, dimungkinkan untuk menentukan bentuk dan varian penyakit yang sesuai dengannya, yaitu, berdasarkan fenotip imunologis sel, untuk melakukan diagnostik diferensial, yang paling sulit pada penyakit limfoproliferatif, karena sel utama substrat patologis penyakit adalah sel yang secara morfologis hampir identik.

Fenotipe memungkinkan penggunaan antibodi monoklonal untuk menentukan tipe sel darah blast dan sel darah dewasa dari seri myelo-, mono-, dan limfositik dengan adanya antigen diferensiasi (reseptor) di dinding sel. Bagian "Penilaian status imun tubuh" sebagian menjelaskan karakteristik dan nilai diagnostik dari studi penanda seluler; berikut ini adalah deskripsi singkat tentang penanda antigen sel dalam kaitannya dengan diagnosis hemoblastosis. Antigen (penanda) berikut dapat dideteksi pada membran sel darah dan sumsum tulang merah.

• CD2 adalah glikoprotein transmembran monomerik. Protein ini terdapat pada permukaan semua limfosit T yang beredar dalam darah dan pada beberapa limfosit NK. CD2 terlibat dalam proses aktivasi alternatif limfosit T. Deteksi CD2 menggunakan antibodi monoklonal dalam praktik klinis digunakan untuk menentukan fenotipe leukemia sel T akut, limfoma, kondisi inflamasi kronis, dan defisiensi imun.
• CD3 adalah kompleks protein yang dikaitkan dengan reseptor sel T spesifik antigen, yang merupakan penanda fungsional utama limfosit T. CD3 memfasilitasi transfer sinyal aktivasi dari membran ke sitoplasma sel. Penentuan CD3 diindikasikan untuk diagnosis leukemia sel T akut, limfoma (CD3 tidak diekspresikan dalam neoplasma limfoid non-sel T) dan penyakit defisiensi imun.
• CD4 adalah glikoprotein transmembran yang diekspresikan oleh subpopulasi T-helper (inducer), yang merupakan 45% dari limfosit darah tepi. Pada tahap awal perkembangan limfosit di timus, antigen CD4, serta CD8, diekspresikan oleh semua limfosit kortikal. Timosit meduler, yang fenotipenya mirip dengan sel T CD4+ dewasa dari darah tepi (T-helper), sudah mengekspresikan reseptor CD4 atau CD8. Dalam darah tepi, hingga 5% sel membawa penanda CD4 dan CD8. Ekspresi CD4 yang lebih kecil mungkin terjadi pada beberapa sel dari seri monosit. CD4 diekspresikan dalam sebagian besar kasus limfoma sel T, termasuk mikosis fungoides, serta pada leukemia sel T terkait HTLV (HTLV - human T-lymphotropic virus).
• CD5 adalah glikoprotein rantai tunggal yang terdapat pada semua limfosit T dewasa dan sebagian besar timosit, dan diekspresikan secara lemah oleh limfosit B. CD5 terdeteksi pada sel neoplastik leukemia limfositik kronis sel B dan limfoma sentrosit. Pada jenis penyakit limfoid ganas lainnya - limfoma folikular, leukemia sel berbulu, limfoma sel besar - CD5 tidak diekspresikan.
• CD7 adalah protein rantai tunggal, penanda paling awal diferensiasi sel T. Protein ini diekspresikan oleh pro-limfosit T bahkan sebelum bermigrasi ke timus. CD7 terdeteksi pada sebagian besar sel NK, ekspresi yang lemah terlihat pada monosit. Limfosit B dan granulosit tidak mengandung antigen ini. Penentuan CD7 digunakan untuk mendiagnosis limfoma, leukemia limfoblastik sel T pada anak-anak.
• CD8 adalah protein yang terdiri dari dua rantai polipeptida yang dihubungkan oleh jembatan disulfida. Protein ini diekspresikan oleh subpopulasi limfosit T sitotoksik dan limfosit T supresor, yang mencakup 20-35% limfosit darah tepi. Antigen ini juga diekspresikan oleh limfosit NK, timosit kortikal, 30% timosit meduler, dan subpopulasi sel sumsum tulang merah. CD8 dipelajari untuk mengukur kandungan sel T supresor (lihat bagian “Limfosit T supresor dalam darah” di atas).

• CD10 adalah endopeptidase yang terkait dengan membran sel. CD10 diekspresikan oleh bentuk limfosit B muda dan subpopulasi limfosit kortikal. CD10 diekspresikan oleh semua sel ALL.
• CD11c diekspresikan pada membran sel oleh makrofag, monosit, granulosit, sel NK, dan sel leukemia sel berbulu.
• CD13 adalah glikoprotein yang diekspresikan oleh sel-sel dari garis keturunan mielomonosit (sel progenitor, neutrofil, basofil, eosinofil, monosit, dan sel leukemia myeloid). Protein ini tidak ditemukan dalam limfosit T dan B, eritrosit, dan trombosit.
• CD14 adalah glikoprotein membran permukaan. Protein ini diekspresikan terutama oleh monosit dan makrofag. CD14 terdeteksi pada lebih dari 95% monosit dalam darah tepi dan sumsum tulang. Ekspresi CD14 yang kuat diamati pada leukemia mieloblastik akut. Antigen ini tidak diekspresikan pada leukemia limfoblastik akut dan kronis.
• CD15 adalah oligosakarida. Ia terlibat dalam fagositosis dan kemotaksis. Antigen ini terdapat pada permukaan granulosit dewasa dan sel Berezovsky-Sternberg. Ekspresi antigen CD15 terdeteksi pada penyakit Hodgkin. Pada limfoma non-Hodgkin, CD15 tidak terdeteksi dalam kebanyakan kasus.
• CD16 diekspresikan pada permukaan granulosit, monosit, makrofag, dan sel NK. Semua limfosit yang mengekspresikan antigen ini memiliki kapasitas untuk sitotoksisitas seluler yang bergantung pada antibodi. CD16 ditentukan selama penentuan tipe leukemia mielositik kronis, untuk mengkarakterisasi sel NK.
• CD19 adalah glikoprotein yang terdapat pada semua limfosit B perifer dan semua prekursor sel B. Protein ini tidak ditemukan pada sel plasma. Protein ini merupakan penanda paling awal sel B dan berperan penting dalam mengatur aktivasi dan proliferasi sel B. CD19 diekspresikan pada semua sel neoplastik leukemia akut yang berasal dari sel B dan juga terdapat pada beberapa bentuk leukemia monoblastik akut.
• CD20 adalah protein nonglikosilasi. Dalam ontogenesis limfosit B, antigen CD20 muncul setelah CD19 pada tahap pradiferensiasi sel B limfosit. Antigen ini tidak ada dalam membran plasma sel plasma. Antigen ini diekspresikan dalam ALL, leukemia limfositik kronis sel B, leukemia sel berbulu, limfoma Burkitt, dan sangat jarang pada leukemia monoblastik akut.
• CD21 adalah glikoprotein yang terdapat dalam jumlah signifikan pada limfosit B di organ limfoid dan dalam jumlah kecil pada sel B dalam darah tepi. CD21 adalah reseptor untuk virus Epstein-Barr.
• CD22 adalah protein yang terdiri dari dua rantai polipeptida. Protein ini diekspresikan pada membran sebagian besar limfosit B, termasuk sel prekursor (prolimfosit). Antigen tidak diekspresikan pada limfosit B (sel plasma) setelah aktivasinya. Ekspresi CD22 yang paling menonjol terdeteksi pada sel-sel pada leukemia sel berbulu, ekspresi yang lemah pada leukemia myeloid dan ALL non-sel T.
• CD23 merupakan glikoprotein yang diekspresikan dalam jumlah yang jauh lebih tinggi oleh limfosit B darah tepi yang teraktivasi. CD23 memediasi sitotoksisitas dan fagositosis yang bergantung pada IgE oleh makrofag dan eosinofil.
• CD25 adalah glikoprotein rantai tunggal yang diidentifikasi sebagai reseptor afinitas rendah untuk IL-2. Reseptor ini diekspresikan pada limfosit T yang aktif dan, pada kepadatan yang lebih rendah, pada sel B yang aktif. Dalam darah tepi individu yang sehat, antigen tersebut terdapat pada lebih dari 5% sel limfoid.
• CD29 adalah reseptor fibronektin. Reseptor ini tersebar luas di jaringan dan diekspresikan oleh leukosit. Deteksi CD29 pada sel darah tepi digunakan untuk menentukan jenis subpopulasi sel T dengan fenotipe CD4+CD29+, yang disebut sel pembantu tipe 2 (Th2). Sel-sel ini berpartisipasi dalam respons imun humoral dengan memproduksi limfokin.
• CD33 adalah glikoprotein transmembran. Protein ini terdapat pada permukaan sel seri myeloid dan monositik. Protein ini ditemukan pada permukaan monosit dan, pada tingkat yang lebih rendah, granulosit dalam darah tepi. Sekitar 30% sel sumsum tulang merah mengekspresikan CD33, termasuk mieloblas, promielosit, dan mielosit. Antigen ini tidak ada pada membran sel induk pluripoten. Penentuan CD33 digunakan untuk mengkarakterisasi sel-sel leukemia yang berasal dari myeloid. Sel-sel leukemia yang berasal dari limfoid dan eritroid tidak mengekspresikan CD33.
• CD34 adalah fosfoglikoprotein yang diekspresikan oleh sel progenitor hematopoietik, termasuk sel induk monopoten. Ekspresi Ag yang paling menonjol diamati pada progenitor awal; seiring sel matang, ekspresi penanda menurun. CD34 juga ditemukan pada sel endotel. Penentuan CD34 digunakan untuk mengkarakterisasi sel pada leukemia mieloblastik dan limfoblastik akut. Pada leukemia limfositik kronis dan limfoma, ekspresi antigen CD34 tidak terdeteksi.

• CD41a diekspresikan oleh trombosit dan megakariosit. Antibodi monoklonal untuk mendeteksi CD41a digunakan untuk mendiagnosis leukemia megakarioblastik. Pada trombastenia Glanzmann, ekspresi antigen ini tidak ada atau ditekan secara signifikan.
• CD42b adalah glikoprotein membran yang terdiri dari dua rantai polipeptida. Penanda ini dideteksi pada permukaan trombosit dan megakariosit. Dalam praktik klinis, deteksi CD42b digunakan untuk mendiagnosis trombositopati - sindrom Bernard-Soulier.
• CD45RA termasuk dalam golongan glikoprotein transmembran. Ia merupakan antigen leukosit yang umum. Ia diekspresikan pada membran sel limfosit B, pada tingkat yang lebih rendah pada limfosit T, dan pada timosit meduler dewasa. Penanda ini tidak diekspresikan oleh granulosit.
• CD45RO adalah isoform molekul rendah dari CD45RA, antigen leukosit umum. Ia terdeteksi pada sel T (limfosit T memori), subpopulasi limfosit B, monosit, dan makrofag. Antibodi monoklonal terhadap CD45RO berinteraksi dengan sebagian besar timosit, subpopulasi limfosit T CD4+ dan CD8+ yang sedang beristirahat, dan sel T dewasa yang aktif. Sel-sel asal mielomonosit, granulosit, dan monosit juga membawa antigen ini. Ia terdeteksi pada limfoma sentroblastik dan imunoblastik.
• CD46 adalah dimer yang mengalami glikosilasi O. CD46 tersebar luas dalam jaringan dan diekspresikan oleh limfosit T dan B, monosit, granulosit, sel NK, trombosit, sel endotel, fibroblas, tetapi tidak ditemukan pada permukaan sel darah merah. CD46 memberikan perlindungan jaringan dari komplemen.
• CD61 adalah antigen trombosit. Ia diekspresikan pada trombosit darah tepi dan sumsum tulang merah, serta pada megakariosit dan megakarioblas. Penentuannya digunakan sebagai penanda pada leukemia megakarioblas akut. Ekspresi antigen tidak ada atau ditekan pada pasien dengan trombastenia Glanzmann.
• CD95, yang juga disebut Fas atau APO-1, adalah glikoprotein transmembran, anggota keluarga reseptor faktor nekrosis tumor. Protein ini diekspresikan dalam jumlah yang signifikan pada limfosit T (CD4+ dan CD8+) dalam darah perifer dan, pada tingkat yang lebih rendah, pada limfosit B dan sel NK. Antigen ini juga diekspresikan pada granulosit, monosit, sel jaringan, dan sel neoplastik. Pengikatan CD95 ke ligan Fas (CD95L) menginduksi apoptosis pada sel.
• CD95L, atau ligan Fas, adalah protein membran yang termasuk dalam famili reseptor faktor nekrosis tumor. Antigen ini diekspresikan oleh limfosit T sitotoksik, sel NK, dan sangat sering sel tumor; ini adalah pemicu utama apoptosis dalam sel.
• HLA-DR merupakan penentu monomorfik molekul kelas II dari kompleks histokompatibilitas mayor (HLA) manusia. Penanda ini diekspresikan pada sel Langerhans, sel dendritik organ limfoid, beberapa jenis makrofag, limfosit B, sel T aktif, dan sel epitel timus. Studi penanda ini digunakan untuk penentuan kuantitatif limfosit T aktif dengan fenotipe CD3+ HLA-DR+.

Dengan menggunakan pilihan antibodi monoklonal yang berbeda terhadap penanda, adalah mungkin untuk membuat gambaran fenotipik sel-sel yang menjadi ciri khas suatu bentuk leukemia tertentu.

Selain penggunaan metode imunofenotipe untuk diagnostik dan diagnostik diferensial hemoblastosis, penggunaannya dalam proses pengobatan untuk menilai keadaan remisi dan populasi sisa sel leukemia telah terbukti sangat penting. Mengetahui "potret" fenotipik sel blast selama periode diagnosis, penanda ini memungkinkan untuk mendeteksi sel klon leukemia selama periode remisi, dan dengan peningkatan jumlahnya - untuk memprediksi perkembangan kekambuhan jauh sebelum (1-4 bulan) munculnya tanda-tanda klinis dan morfologisnya.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]