Kariotipe

Kultur darah jangka pendek, sel sumsum tulang, dan kultur fibroblas paling sering digunakan untuk mempelajari kromosom. Darah dengan antikoagulan yang dikirim ke laboratorium disentrifugasi untuk mengendapkan eritrosit, dan leukosit diinkubasi dalam media kultur selama 2-3 hari. Fitohemaglutinin ditambahkan ke sampel darah, karena mempercepat penggumpalan eritrosit dan merangsang pembelahan limfosit. Fase yang paling cocok untuk mempelajari kromosom adalah metafase mitosis, jadi kolkisin digunakan untuk menghentikan pembelahan limfosit pada tahap ini. Menambahkan obat ini ke kultur menyebabkan peningkatan proporsi sel dalam metafase, yaitu, pada tahap siklus sel saat kromosom paling terlihat. Setiap kromosom bereplikasi (menghasilkan salinannya sendiri) dan, setelah pewarnaan yang tepat, terlihat sebagai dua kromatid yang menempel pada sentromer, atau penyempitan sentral. Sel-sel tersebut kemudian diobati dengan larutan natrium klorida hipotonik, difiksasi, dan diwarnai.

Untuk pewarnaan kromosom, pewarna Romanovsky-Giemsa, 2% acetcarmine atau 2% acetarsein paling sering digunakan. Pewarna ini mewarnai kromosom secara menyeluruh, merata (metode rutin) dan dapat digunakan untuk mendeteksi anomali numerik kromosom manusia.

Untuk memperoleh gambaran terperinci tentang struktur kromosom, mengidentifikasi (mendefinisikan) kromosom individu atau segmennya, berbagai metode pewarnaan diferensial digunakan. Metode yang paling umum digunakan adalah Giemsa, serta pita G dan Q. Saat memeriksa mikroskopi preparasi sepanjang kromosom, sejumlah pita yang diwarnai (heterokromatin) dan tidak diwarnai (eukromatin) terungkap. Sifat lurik melintang yang diperoleh dengan cara ini memungkinkan identifikasi setiap kromosom dalam set, karena pergantian pita dan ukurannya benar-benar individual dan konstan untuk setiap pasangan.

Pelat metafase sel-sel individual difoto. Kromosom individual dipotong dari foto-foto dan ditempelkan secara berurutan pada selembar kertas; gambar kromosom ini disebut kariotipe.

Penggunaan pewarnaan tambahan, serta metode baru untuk memperoleh preparat kromosom yang memungkinkan kromosom diregangkan panjangnya, secara signifikan meningkatkan akurasi diagnostik sitogenetik.

Tata nama khusus telah dikembangkan untuk menggambarkan kariotipe manusia. Kariotipe normal pria dan wanita masing-masing ditetapkan sebagai 46, XY dan 46, XX. Pada sindrom Down, yang ditandai dengan adanya kromosom tambahan 21 (trisomi 21), kariotipe wanita digambarkan sebagai 47, XX 21+, dan pria adalah 47, XY, 21+. Jika terdapat anomali struktural kromosom, perlu untuk menunjukkan lengan panjang atau pendek yang berubah: huruf p menunjukkan lengan pendek, q menunjukkan lengan panjang, dan t menunjukkan translokasi. Jadi, dalam kasus penghapusan lengan pendek kromosom 5 (sindrom cri du chat), kariotipe wanita digambarkan sebagai 46, XX, 5p-. Ibu dari seorang anak dengan sindrom Down translokasi, pembawa translokasi seimbang 14/21, memiliki kariotipe 45, XX, t(14q; 21q). Kromosom translokasi terbentuk oleh fusi lengan panjang kromosom 14 dan 21, dan lengan pendeknya hilang.

Setiap lengan dibagi menjadi beberapa daerah, yang selanjutnya dibagi lagi menjadi beberapa segmen, yang keduanya ditandai dengan angka Arab. Sentromer kromosom adalah titik awal untuk menghitung daerah dan segmen.

Dengan demikian, empat label digunakan untuk topografi kromosom: nomor kromosom, simbol lengan, nomor wilayah, dan nomor segmen dalam wilayah tersebut. Misalnya, entri 6p21.3 berarti bahwa kita berbicara tentang kromosom 6 dari pasangan ke-6, lengan pendeknya, wilayah 21, segmen 3. Ada juga simbol tambahan, khususnya pter - ujung lengan pendek, qter - ujung lengan panjang.

Metode penelitian sitogenetik memungkinkan mendeteksi penghapusan dan perubahan lain pada kromosom yang hanya berukuran sekitar 1 juta basa (nukleotida).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]