PCR sebagai metode diagnosa penyakit genetik
Terakhir ditinjau: 23.04.2024
Semua konten iLive ditinjau secara medis atau diperiksa fakta untuk memastikan akurasi faktual sebanyak mungkin.
Kami memiliki panduan sumber yang ketat dan hanya menautkan ke situs media terkemuka, lembaga penelitian akademik, dan, jika mungkin, studi yang ditinjau secara medis oleh rekan sejawat. Perhatikan bahwa angka dalam tanda kurung ([1], [2], dll.) Adalah tautan yang dapat diklik untuk studi ini.
Jika Anda merasa salah satu konten kami tidak akurat, ketinggalan zaman, atau dipertanyakan, pilih dan tekan Ctrl + Enter.
PCR adalah pencapaian baru dalam genetika molekuler, yang digunakan untuk amplifikasi DNA dan memungkinkan bagian DNA tertentu (yaitu gen apapun yang diminati) untuk direplikasi secara cepat secara in vitro lebih dari 200.000 kali. Untuk melakukan reaksinya, cukup untuk memiliki bahan DNA satu sel; jumlah DNA yang diperkuat oleh PCR begitu besar sehingga DNA ini hanya dapat diwarnai (menggunakan probe radioaktif setelah elektroforesis tidak diperlukan). Prasyarat untuk melakukan PCR adalah pengetahuan tentang urutan nukleotida dari daerah DNA yang diperkuat untuk pemilihan yang tepat dari primer yang disintesis secara artifisial.
Saat ini, PCR adalah proses yang terjadi dalam satu tabung dan terdiri dari siklus pengulangan amplifikasi (duplikasi, penyalinan) urutan molekul DNA yang terurut untuk mendapatkan sejumlah salinan yang cukup besar yang dapat diidentifikasi melalui elektroforesis. Salah satu komponen kunci dari reaksinya adalah "primer" - oligonukleotida sintetis yang terdiri dari 20-30 basa, saling melengkapi "situs" (bagian) anil (lampiran) pada lokasi DNA template yang teridentifikasi.
PCR berjalan secara otomatis dalam termostat yang dapat diprogram - thermocycler (thermocycler). Siklus tiga langkah, yang menghasilkan replika bagian DNA template yang dapat diidentifikasi, diulang 30 sampai 50 kali sesuai dengan program preset pengendara termal. Pada siklus pertama, oligopramer melakukan hibridisasi dengan DNA template asli, dan kemudian (dalam siklus berikutnya) dan molekul DNA yang baru disintesis saat mereka menumpuk dalam campuran reaksi. Dalam kasus terakhir, sintesis DNA tidak berakhir karena perubahan dalam rezim suhu, namun setelah mencapai batas DNA polimerase dari daerah yang diperkuat, yang menentukan ukuran daerah DNA yang baru disintesis menjadi satu nukleotida.
Sebagai metode untuk mendeteksi molekul DNA yang diperoleh, elektroforesis digunakan, dengan cara bahan yang diperkuat dibagi sesuai dengan ukuran amplikon (produk amplifikasi).
Dengan bantuan PCR, adalah mungkin untuk secara langsung menyelidiki situs lokalisasi dugaan mutasi atau situs polimorfik, dan juga untuk mempelajari adanya fitur spesifik DNA lainnya.
[