Virus Hepatitis A

Hepatitis A virus adalah penyakit menular pada manusia, yang ditandai terutama oleh kerusakan hati dan secara klinis dimanifestasikan oleh keracunan dan penyakit kuning. Virus hepatitis A ditemukan pada tahun 1973 oleh S. Feinstone (et al.) menggunakan metode mikroskop elektron imun dan dengan menginfeksi monyet - simpanse dan marmoset. Inti dari metode mikroskop elektron imun adalah antibodi spesifik (serum konvalesen) ditambahkan ke filtrat tinja pasien dengan hepatitis A dan sedimen dikenakan mikroskop elektron. Karena interaksi virus dengan antibodi spesifik, mereka mengalami agregasi spesifik. Dalam hal ini, mereka lebih mudah dideteksi, dan agregasi di bawah pengaruh antibodi menegaskan spesifisitas patogen. Penemuan S. Feinstone dikonfirmasi dalam percobaan pada sukarelawan.

Virus hepatitis A berbentuk bulat, diameter virionnya 27 nm. Genomnya berupa RNA positif untai tunggal dengan mm 2,6 MD. Tidak ada superkapsid. Tipe simetrinya kubik - ikosahedron. Kapsidnya memiliki 32 kapsomer, dibentuk oleh empat polipeptida (VP1-VP4). Berdasarkan sifatnya, virus hepatitis A termasuk dalam genus Heparnovirus, famili Picornaviridae. Dari segi antigen, virus hepatitis A (HAV - virus hepatitis A) bersifat homogen. HAV bereproduksi dengan baik dalam tubuh simpanse, babon, babon hamadrias, dan monyet marmoset. Untuk waktu yang lama, virus tersebut tidak dapat dikulturkan. Baru pada tahun 1980-an dimungkinkan untuk memperoleh kultur sel tempat HAV bereproduksi. Pada awalnya, garis sel kontinu dari ginjal embrio kera rhesus (kultur FRhK-4) digunakan untuk tujuan ini, dan sekarang garis sel kontinu dari sel ginjal monyet hijau (kultur 4647) digunakan.

Berdasarkan rekomendasi para ahli WHO, nomenklatur penanda virus hepatitis A berikut telah diadopsi: virus hepatitis A - antibodi HAV terhadap virus hepatitis A: anti-HAV IgM dan anti-HAV IgG.

HAV merupakan partikel kecil dengan diameter 27-30 nm, memiliki simetri ikosahedral dan memiliki homogenitas. Elektronogram yang diperoleh menggunakan metode agregasi imun menunjukkan partikel yang padat elektron dengan kapsomer yang tersusun simetris di permukaan. Dengan kontras negatif, partikel penuh dan kosong terlihat dalam sediaan. Nukleokapsid HAV, tidak seperti influenza, tidak memiliki tonjolan permukaan dan membran. Penting juga bahwa virion HAV tidak memiliki struktur berbentuk hati.

Berdasarkan sifat fisikokimianya, virus hepatitis A tergolong dalam famili picornavirus, genus enterovirus dengan nomor seri 72. Akan tetapi, taksonomi ini ternyata terlalu tidak lazim, sehingga WHO menganggap mungkin untuk tetap menggunakan terminologi “virus hepatitis A”.

Seperti semua virus dari famili Picornaviridae, virus hepatitis A mengandung asam ribonukleat. Beberapa laboratorium telah menunjukkan kemungkinan kloning genom virus hepatitis A, yang membuka prospek untuk memperoleh vaksin.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Resistensi Virus Hepatitis A

Virus ini relatif tahan terhadap suhu tinggi, asam, pelarut lemak (bukan lipid), desinfektan, dan mentoleransi suhu rendah dengan baik. Semua ini berkontribusi pada pelestarian jangka panjangnya di lingkungan eksternal. Pada suhu kamar, virus ini bertahan selama beberapa minggu, pada suhu 60 °C virus ini sebagian kehilangan daya infeksinya setelah 4-12 jam, dan sepenuhnya - setelah beberapa menit pada suhu 85 °C. Virus ini sangat tahan terhadap klorin, sehingga dapat menembus ke dalam air keran melalui penghalang fasilitas pengolahan air.

Merangkum semua data, kita dapat mengkarakterisasi virus hepatitis A sebagai berikut:

• tuan rumah alaminya adalah manusia;
• hewan percobaan - marmoset, simpanse;
• sumber infeksi adalah tinja;
• penyakit ini bersifat epidemi dan endemik;
• jalur penularan: feko-oral;
• masa inkubasi - 14-40 hari;
• transisi ke hepatitis kronis - tidak diamati.

Sifat imunologi HAV adalah sebagai berikut:

• Strain prototipe - Ms-1, CR-326, GВG. Semuanya memiliki kesamaan imunologi atau identik;
• Antibodi - IgM dan IgG, diproduksi sebagai respons terhadap pengenalan protein struktural virus dan bersifat protektif;
• I. Efek perlindungan gamma globulin serum manusia - mencegah atau melemahkan penyakit jika diberikan sebelum infeksi atau selama masa inkubasi.

Karakteristik fisikokimia NAU adalah sebagai berikut:

• Morfologi: partikel bulat tanpa cangkang dengan simetri kubik, kapsid terdiri dari 32 kapsomer;
• Diameter- 27-30nm;
• Kepadatan dalam CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (partikel terbuka), 1,33-1,34 (virion matang), 1,29-1,31 (virion belum matang, partikel kosong);
• Koefisien sedimentasi - 156-160 virion dewasa;
• Asam nukleat adalah RNA untai tunggal linier;
• Berat molekul relatif - 2,25 106-2,8 106KD;
• Jumlah nukleotida adalah 6.500-8.100.

Stabilitas HAV di bawah pengaruh fisik dan kimia adalah sebagai berikut:

• Kloroform, eter - stabil;
• Klorin, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 menit - inaktivasi parsial;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 menit - inaktivasi lengkap;
• Formalin, 1:4000, 35-37 °C, 72 jam - inaktivasi lengkap, 1:350, 20 °C, 60 menit - inaktivasi sebagian.

Suhu:

• 20-70 °C - stabil;
• 56 °C, 30 menit - stabil;
• 60 °C, 12 jam - inaktivasi parsial;
• 85 °C, 1 menit - inaktivasi lengkap;
• Autoklaf, 120 °C. 20 menit - inaktivasi lengkap;
• Panas kering, 180 °C, 1 jam - inaktivasi lengkap;
• UFO, 1,1 W, 1 menit - inaktivasi total.

Data yang disajikan menunjukkan bahwa dalam sifat fisikokimianya, virus hepatitis A paling mirip dengan enterovirus. Seperti enterovirus lainnya, HAV tahan terhadap banyak larutan desinfektan dan sepenuhnya dinonaktifkan dalam beberapa menit pada suhu 85 °C dan autoklaf.

Telah terbukti bahwa virus hepatitis A dapat bereproduksi dalam galur monolapis primer dan kontinu dari kultur sel manusia dan monyet. Reproduksi virus hepatitis A yang sangat aktif dalam kultur in vitro diamati ketika menggunakan ekstrak hati dari monyet yang sakit sebagai bahan awal. Akan tetapi, perlu dicatat bahwa dalam semua percobaan reproduksi virus hepatitis A pada kultur in vitro, perhatian diarahkan pada periode inkubasi yang panjang selama pasase primer (hingga 4-10 minggu), selanjutnya akumulasi materi genetik virus meningkat, tetapi nilai absolutnya tetap sangat tidak signifikan, yang memberikan dasar bagi banyak peneliti untuk berbicara tentang replikasi virus hepatitis A yang tidak lengkap dalam kultur jaringan.

Merangkum data literatur tentang reproduksi virus hepatitis A dalam kultur ekstra-jaringan, dapat dikatakan bahwa fakta kelangsungan hidup jangka panjang HAV in vitro tidak diragukan lagi. Kondisi optimal untuk replikasi virus tingkat tinggi yang stabil belum diidentifikasi secara pasti, dan ini menghambat studi tentang sifat biologisnya, memperoleh sumber reagen untuk produksi diagnostik dan desain vaksin.

Pada saat yang sama, penilaian yang lebih optimis tentang masalah ini dapat ditemukan dalam literatur. Solusi dari semua masalah yang terkait dengan budidaya virus hepatitis A adalah masalah masa depan yang dekat. Ketika mempelajari kondisi optimal untuk reproduksi HAV dalam kultur sel ginjal embrionik monyet rhesus, dua fase diidentifikasi: fase produksi virus menular (hingga 6-8 hari pada tingkat bagian ke-5) dan fase akumulasi intensif antigen virus. Juga ditunjukkan bahwa akumulasi antigen virus yang paling signifikan terjadi dalam kondisi yang disebut budidaya rol (botol berputar). Metode ini membuka peluang luas untuk mendapatkan antigen kultur dalam jumlah besar, dan, akibatnya, bahan sumber untuk persiapan sistem diagnostik dan pembuatan vaksin akan muncul.

Epidemiologi Hepatitis A

Virus hepatitis A sangat patogen bagi manusia. Menurut WHO (1987), infeksi dengan hanya satu virion sudah cukup untuk menyebabkan penyakit. Namun, dosis infeksi praktis mungkin jauh lebih tinggi. Satu-satunya sumber infeksi adalah orang yang terinfeksi. Virus dikeluarkan dalam jumlah besar dengan tinja 12-14 hari sebelum timbulnya penyakit kuning dan selama 3 minggu periode ikterik. Tidak ditemukan perbedaan signifikan dalam ekskresi patogen pada pasien dengan bentuk hepatitis A ikterik, anikterik, dan asimtomatik. Rute infeksi adalah fekal-oral, terutama ditularkan melalui air, serta melalui rumah tangga dan makanan. Rute penularan utama (primer) virus adalah melalui air. Infeksi melalui droplet di udara juga mungkin terjadi. Kerentanan populasi bersifat universal. Sebagian besar anak-anak di bawah usia 14 tahun terpengaruh. Penyakit ini memiliki musim gugur-musim dingin yang jelas.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Gejala Hepatitis A

Masa inkubasi bervariasi dari 15 hingga 50 hari, tergantung pada dosis infeksi virus, tetapi rata-rata adalah 28-30 hari. Setelah berada di dalam tubuh, virus hepatitis A berkembang biak di kelenjar getah bening regional, menembus darah, dan kemudian sel-sel hati dan menyebabkan hepatitis difus akut, yang disertai dengan kerusakan hepatosit dan elemen retikuloendotelial hati dan penurunan fungsi detoksifikasi dan penghalangnya. Kerusakan hepatosit terjadi bukan karena aksi langsung virus, tetapi sebagai akibat dari mekanisme imunopatologis. Gambaran hepatitis A yang paling khas adalah bentuk siklik ikterik akut: masa inkubasi, prodromal (pra-ikterik), periode ikterik, dan pemulihan. Namun, dalam fokus infeksi, sejumlah besar pasien dengan bentuk infeksi anikterik dan asimtomatik terdeteksi, yang jumlahnya secara signifikan lebih dominan daripada yang ikterik ("fenomena gunung es").

Kekebalan pasca infeksi kuat dan tahan lama, disebabkan oleh antibodi penawar virus dan sel memori imun.

Diagnostik mikrobiologi hepatitis A

Diagnostik hepatitis A (kecuali untuk infeksi hewan - simpanse, marmoset, babon, yang tidak kita miliki) didasarkan pada berbagai metode imunologi: RSC, metode imunofluoresensi, hemaglutinasi adhesi imun (kompleks antigen virus + antibodi dengan adanya komplemen diserap pada eritrosit dan menyebabkan perekatannya). Namun, kemungkinan penggunaan metode ini terbatas karena kurangnya antigen virus yang spesifik, dan reaksi imunofluoresensi memerlukan biopsi hati, yang tidak diinginkan. Metode mikroskop elektron imun dapat diandalkan dan spesifik, tetapi sangat padat karya. Oleh karena itu, sejauh ini satu-satunya reaksi imunologi yang dapat diterima adalah metode analisis imunosorben fase padat dalam bentuk IFM atau RIM, terutama dalam modifikasi "penangkapan" imunoglobulin kelas M. Di negara kita, sistem pengujian telah diusulkan untuk tujuan ini - "DIAGN-A-HEP". Prinsip pengoperasian sistem pengujian ini adalah sebagai berikut. Pertama, antibodi terhadap imunoglobulin kelas M (antiimunoglobulin M) diserap pada dinding sumur polistirena, kemudian serum pasien yang akan diuji ditambahkan. Jika mengandung antibodi IgM, maka akan berikatan dengan anti-antibodi kelas M, kemudian ditambahkan antigen virus spesifik (virus hepatitis A), yang diperoleh dengan cara tumbuh dalam kultur sel. Sistem tersebut dicuci, dan antibodi antivirus yang diberi label dengan peroksidase lobak ditambahkan ke dalamnya. Jika keempat komponen sistem berinteraksi, terbentuklah "sandwich" empat lapis:

• antiimunoglobulin M,
• imunoglobulin M (melawan virus hepatitis A - dalam serum pasien yang diteliti),
• antigen virus,
• antibodi antivirus berlabel enzim.

Untuk mendeteksi kompleks ini, substrat untuk enzim ditambahkan ke dalam sumur. Di bawah pengaruh enzim, substrat tersebut dihancurkan, dan terbentuklah produk berwarna. Intensitas warna dapat diukur secara kuantitatif menggunakan spektrofotometer atau fotokolorimeter.

Keuntungan metode "penangkapan" IgM adalah antibodi golongan imunoglobulin ini muncul selama respons imun primer dan menunjukkan tahap infeksi aktif, antibodi tersebut menghilang setelah penyakit diderita. Sebaliknya, antibodi antivirus yang termasuk golongan IgG bertahan lama setelah penyakit diderita, sehingga memberikan kekebalan yang didapat. Metode pemeriksaan DNA telah diusulkan untuk mendeteksi virus hepatitis A: DNA vRNA komplementer digunakan sebagai pemeriksaan.

Pengobatan Hepatitis A

Karena produksi interferon terganggu pada hepatitis virus, pengobatan hepatitis A didasarkan pada penggunaan interferon dan penginduksi sintesis endogennya, amixin.

Pencegahan spesifik hepatitis A

Sebelumnya, seroprofilaksis hepatitis A dengan gamma globulin yang banyak digunakan tidak terbukti efektif, oleh karena itu penekanan utama diberikan pada pelaksanaan vaksinasi profilaksis, vaksinasi terhadap hepatitis A dilakukan. Untuk tujuan ini, berbagai jenis vaksin sedang dikembangkan dan sudah digunakan. Di Rusia, vaksin yang efektif terhadap hepatitis A diperoleh pada tahun 1995, dan sekarang berhasil digunakan.