Virus hepatitis A

Viral hepatitis A adalah penyakit menular manusia yang ditandai dengan kerusakan hati yang dominan dan bermanifestasi secara klinis dan ikterus. Virus Hepatitis A terdeteksi pada tahun 1973 oleh S. Feinstone (dan yang lainnya) dengan menggunakan metode mikroskop elektron kekebalan dan dengan menginfeksi monyet - simpanse dan marmoset. Inti dari metode mikroskop elektron kekebalan adalah antibodi spesifik (serum pemulihan) ditambahkan ke filtrat tinja pasien dengan hepatitis A dan endapannya dikenai mikroskop elektron. Karena interaksi virus dengan antibodi spesifik, mereka mengalami agregasi spesifik. Dalam kasus ini, mereka lebih mudah dideteksi, dan agregasi di bawah pengaruh antibodi menegaskan kekhususan patogen. Penemuan S. Feinstone dikonfirmasi dalam eksperimen pada sukarelawan.

Virus Hepatitis A memiliki bentuk bola, diameter virion adalah 27 nm. Genom diwakili oleh RNA positif untai tunggal dengan massa 2,6 MD. Supercapsid tidak ada Jenis simetri adalah kubik - icosahedron. Kapsul memiliki 32 capsomers, dibentuk oleh empat polipeptida (VP1-VP4). Dengan sifatnya, virus hepatitis A termasuk dalam genus Heparnovirus, keluarga Picornaviridae. Secara antigen, virus hepatitis A (virus HAV-hepatitis A) bersifat homogen. HAV berkembang biak dengan baik di tubuh simpanse, babun, hamadryls dan monyet perjudian (marmoset). Untuk waktu yang lama, virus tidak bisa berkultivasi. Baru di tahun 1980an. Adalah mungkin untuk mendapatkan kultur sel di mana HAV merambat. Awalnya, untuk tujuan ini, transplantasi ginjal dari ginjal monyet rhesus (kultur FRhK-4) digunakan, dan sekarang - garis transplantasi sel ginjal monyet hijau (budaya 4647).

Menurut rekomendasi dari para ahli WHO, nomenklatur berikut penanda virus hepatitis A diadopsi: antibodi hepatitis A virus-NAU terhadap virus hepatitis A: IgM anti-NAV dan IgG anti-NAV.

HAV adalah partikel kecil dengan diameter 27-30 nm, memiliki simetri icosahedral dan memiliki homogenitas. Pada pola difraksi elektron yang diperoleh dengan metode agregasi imun, partikel padat elektron dengan keripik simetris yang disusun secara dangkal terdeteksi. Dengan kontras negatif, partikel lengkap dan kosong terdeteksi dalam persiapan. NAV Nukleokapsid, tidak seperti influenza, tidak memiliki tonjolan dan membran permukaan. Penting juga bahwa virion HAV tidak memiliki struktur berbentuk hati.

Menurut sifat fisikokimia, virus hepatitis A dikaitkan dengan keluarga picornavirus, genus enterovirus dengan nomor urut 72. Namun, taksonomi seperti itu ternyata terlalu tidak biasa, dan WHO menganggap mungkin untuk meninggalkan istilah "virus hepatitis A".

Seperti semua virus keluarga Picornaviridae, virus hepatitis A mengandung asam ribonukleat. Beberapa laboratorium telah menunjukkan kemungkinan mengkloning genom virus hepatitis A, yang membuka prospek untuk mendapatkan persiapan vaksin.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Resistensi virus hepatitis A

Virus ini relatif tahan terhadap suhu tinggi, asam, pelarut lemak (tidak ada lipid), desinfektan, ia mentolerir suhu rendah dengan baik. Semua ini berkontribusi pada pelestarian jangka panjangnya di lingkungan eksternal. Pada suhu kamar, ia bertahan selama beberapa minggu, pada suhu 60 ° C sebagian kehilangan infektivitas setelah 4-12 jam, benar-benar - setelah beberapa menit pada suhu 85 ° C. Sangat tahan terhadap klorin, karena ia mampu menembus ke dalam air keran melalui penghalang tanaman pengolahan air.

Merangkum semua data, kita bisa mengkarakterisasi virus hepatitis A sebagai berikut:

• master alam adalah manusia;
• hewan percobaan - marmozet, simpanse;
• sumber infeksi - kotoran;
• penyakit - epidemi dan endemik;
• Rute transmisi bersifat fecal-oral;
• masa inkubasi - 14-40 hari;
• transisi ke hepatitis kronis - tidak dicatat.

Properti imunologis NAB adalah sebagai berikut:

• Strain protototype - Ms-l, CR-326, GVG. Semuanya secara imunologis serupa atau identik;
• Antibodi - IgM dan IgG, diproduksi sebagai respons terhadap pengenalan protein struktural virus dan bersifat protektif;
• I Tindakan trofis serum y-globulin manusia - melindungi atau menipiskan penyakit di bawah kondisi pemberian sebelum infeksi atau selama masa inkubasi.

Karakteristik fisiko-kimia NAU adalah sebagai berikut:

• Morfologi adalah partikel bola non-shell dengan simetri kubik, kapsid terdiri dari 32 kapsul;
• Diameternya 27-30 nm;
• Kepadatan dalam CsCl (g / cm3) adalah 1,38-1,46 (partikel terbuka), 1,33-1,34 (virion matang), 1,29-1,31 (virion belum matang, partikel kosong);
• Koefisien sedimentasi adalah 156-160 virion dewasa;
• Asam nukleat - RNA linier tunggal;
• Berat molekul relatif - 2,25 106-2,8 106KD;
• Jumlah nukleotida adalah 6,500-8,100.

Stabilitas NAB dalam efek fisikokimia adalah sebagai berikut:

• Kloroform, eter - stabil;
• Klorin, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, inaktivasi 15 min-parsial;
• Chloramine, 1 g / l, 20 ° C, 15 menit inaktivasi lengkap;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 jam - inaktivasi lengkap, 1: 350, 20 ° С, 60 min - inaktivasi parsial.

Suhu:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С 30 menit - stabil;
• 60 ° С, 12 jam - inaktivasi parsial;
• 85 ° С 1 min - penuh inaktivasi;
• Autoklaf, 120 ° C 20 menit - inaktivasi lengkap;
• Panas kering, 180 ° C, 1h - inaktivasi lengkap;
• UV, 1.1 W, 1 menit - inaktivasi lengkap.

Data yang disajikan menunjukkan bahwa sifat fisikokimia virus hepatitis A paling dekat dengan enterovirus. Seperti enterovirus lainnya, HAV resisten terhadap banyak larutan desinfektan, yang benar-benar tidak aktif selama beberapa menit pada suhu 85 ° C dan diautoklaf.

Terbukti bahwa virus hepatitis A dapat diproduksi ulang pada jalur kultur monolayer primer dan transplantasi sel manusia dan monyet. Terutama reproduksi aktif virus hepatitis A dalam kultur in vitro diamati saat menggunakan ekstrak hati pasien monyet sebagai bahan awal. Namun, perlu dicatat bahwa dalam semua percobaan menurut reproduksi virus hepatitis A dalam budaya in vitro dicatat masa inkubasi yang panjang di bagian primer (-10 sampai 4 minggu), kemudian akumulasi virus meningkat materi genetik, tetapi nilai-nilai mutlak sangat tidak signifikan, yang memberi alasan kepada banyak peneliti untuk membicarakan replikasi virus hepatitis A yang tidak lengkap dalam kultur jaringan.

Meringkas data literatur tentang reproduksi virus hepatitis A dari budaya non-akar, dapat dikatakan bahwa fakta pengalaman berkepanjangan HAV in vitro tidak diragukan lagi. Kondisi optimum untuk replikasi virus tingkat tinggi yang stabil belum akhirnya diketahui, dan ini menghambat studi sifat biologisnya, menghasilkan sumber pereaksi untuk produksi diagnostik dan perancangan vaksin.

Pada saat yang sama, penilaian yang lebih optimis tentang masalah ini dapat ditemukan dalam literatur. Solusi dari semua masalah yang berkaitan dengan penanaman virus hepatitis A adalah masalah untuk waktu dekat. Ketika mempelajari kondisi optimal untuk reproduksi HAV dalam budaya sel ginjal embrio kera-rhesus, dua fase diidentifikasi: fase produksi virus menular (sampai 6-8 hari pada tingkat ke-5) dan fase akumulasi antigen virus secara intensif. Hal ini juga menunjukkan bahwa akumulasi paling signifikan antigen virus terjadi di bawah kondisi apa yang disebut penanaman rol (botol berputar). Dengan cara ini membuka kemungkinan yang luas untuk mendapatkan antigen budaya dalam jumlah banyak, dan akibatnya, bahan awal untuk persiapan sistem diagnostik dan pembuatan sediaan vaksin akan muncul.

Epidemiologi hepatitis A

Virus Hepatitis A memiliki patogenisitas tinggi bagi manusia. Menurut kesimpulan WHO (1987), untuk onset penyakitnya, cukup menginfeksi hanya satu virion. Namun, dosis infeksi yang praktis mungkin jauh lebih tinggi. Sumber infeksi hanya orang yang terinfeksi. Virus ini dilepaskan dalam jumlah banyak dengan kotoran 12-14 hari sebelum munculnya ikterus dan dalam waktu 3 minggu. Periode icteric Perbedaan yang signifikan dalam isolasi patogen pada pasien dengan ikterus ikterus, ikterus dan asimtomatik dari hepatitis A belum diidentifikasi. Metode infeksi adalah feses-oral, terutama berair, dan juga oleh rute rumah tangga dan makanan. Metode infeksi adalah feses-oral, terutama berair, dan juga oleh rute rumah tangga dan makanan. Jalur utama (primer) penularan virus adalah air. Hal ini juga memungkinkan untuk infeksi udara. Kerentanan penduduk bersifat universal. Sebagian besar anak di bawah usia 14 tahun sedang sakit. Penyakit ini memiliki musim gugur yang jelas-musim dingin.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Gejala hepatitis A

Masa inkubasi bervariasi dari 15 sampai 50 hari, yang bergantung pada jumlah dosis virus yang menginfeksi, namun rata-rata 28-30 hari. Begitu berada di dalam tubuh, virus hepatitis A berkembang biak di kelenjar getah bening regional, menembus ke dalam aliran darah dan kemudian masuk ke sel hati dan menyebabkan hepatitis menyebar akut, yang disertai dengan kerusakan pada hepatosit dan elemen retikuloendotelial hati dan penurunan fungsi detoksifikasi dan penghalangnya. Kerusakan pada hepatosit tidak terjadi karena tindakan langsung virus, namun sebagai akibat mekanisme imunopatologis. Gambaran paling umum dari hepatitis A adalah bentuk siklus icteric akut: masa inkubasi, prodromal (precocious), periode icteric dan pemulihan. Namun, dalam fokus infeksi, sejumlah besar pasien dengan bentuk infeksi kuning dan asimtomatik diidentifikasi, jumlah yang secara signifikan terjadi pada icteric ("fenomena gunung es").

Imunitas pasca infeksi kuat dan tahan lama, disebabkan oleh antibodi penawar virus dan sel memori kekebalan.

Diagnosis mikrobiologis hepatitis A

Diagnosis hepatitis A (kecuali hewan infeksi - simpanse marmozet, babon, yang kami telah) berdasarkan berbagai metode imunologi: metode immunofluorescence DGC, adhesi kekebalan hemaglutinasi (kompleks antigen virus + antibodi di hadapan pelengkap teradsorpsi pada eritrosit dan menyebabkan adhesi mereka) . Namun, kemungkinan penggunaan metode ini terbatas karena tidak adanya antigen virus spesifik, dan reaksi imunofluoresensi memerlukan biopsi hati, yang tidak diinginkan. Reliable dan spesifik adalah metode mikroskop elektron kekebalan, namun sangat melelahkan. Oleh karena itu, sampai-satunya metode yang dapat diterima untuk reaksi imunologis adalah Immunosorbent Assay fase padat dalam bentuk IPM, atau RIM, terutama di modifikasi "menangkap" imunoglobulin M. Di negara kita untuk tujuan yang diusulkan sistem tes ini - "DIAG-A-GEO". Prinsip kerja dari sistem pengujian ini adalah sebagai berikut. Pertama, antibodi terhadap imunoglobulin kelas M (anti-imunoglobulin M) diserap di dinding makan siang polystyrene, kemudian serum uji pasien ditambahkan. Jika memiliki antibodi kelas IgM, mereka akan terikat oleh antibodi anti-T M, maka virus spesifik antigen (virus hepatitis A) ditambahkan, yang diperoleh dengan budidaya dalam kultur sel. Sistem ini dicuci dan antibodi antiviral yang diberi label dengan peradangan lobak ditambahkan ke dalamnya. Jika keempat komponen sistem berinteraksi, empat lapis "sandwich" muncul:

• antiimmunoglobulin M,
• imunoglobulin M (melawan virus hepatitis A - pada serum tes pasien),
• antigen virus,
• antibodi antiviral yang diberi label dengan enzim.

Untuk mendeteksi kompleks ini, substrat enzim ditambahkan ke dalam lunet. Di bawah pengaruh enzim, ia hancur, dan produk berwarna terbentuk. Intensitas warna dapat diukur secara kuantitatif dengan spektrofotometer atau fotokopi.

Keuntungan dari metode "penangkapan" IgM adalah antibodi golongan imunoglobulin ini muncul pada respon imun primer dan menunjukkan tahap aktif infeksi, mereka hilang setelah penyakit yang ditransfer . Antibodi antiviral yang termasuk dalam kelas IgG, sebaliknya, bertahan lama setelah penyakit ini, memastikan kekebalan yang didapat. Untuk mendeteksi virus hepatitis A, metode probe DNA telah diusulkan: vRNA komplementer digunakan sebagai probe DNA.

Pengobatan hepatitis A

Karena fakta bahwa produksi interferon terganggu pada hepatitis virus, pengobatan hepatitis A didasarkan pada penggunaan interferon dan induser dari amixin sintesis endogennya.

Pencegahan spesifik hepatitis A

Sebelumnya banyak diterapkan seroprevention hepatitis A gammaglobulin menggunakan tidak dibenarkan, bagaimanapun, penekanan ditempatkan pada holding imunisasi, dilakukan vaksinasi terhadap hepatitis A. Untuk tujuan ini, berbagai varian vaksin sedang dikembangkan dan sudah digunakan. Di Rusia, vaksin yang efektif terhadap hepatitis A diperoleh pada tahun 1995, dan sekarang telah berhasil diterapkan.