Penelitian imunologi dalam urologi

Penugasan imunogram ke pasien urologis berarti bahwa dokter yang merawat mengasumsikan adanya gangguan pada sistem kekebalan tubuh. Infeksi bakteri, virus, jamur berulang, manifestasi alergi, penyakit sistemik dapat menjadi tanda gangguan ini, yang ditandai oleh sejumlah sindrom (infeksius, onkologis, alergi, autoimun, limfoproliferatif). Satu pasien mungkin memiliki beberapa sindrom. Sebagai contoh, penyakit menular kronis (sindrom infeksius) dapat menyebabkan imunodefisiensi, dan imunodefisiensi dapat dimanifestasikan oleh predisposisi terhadap penyakit menular dan onkologis (sindrom onkologis). Predisposisi terhadap infeksi dapat terjadi dengan latar belakang imunodefisiensi sekunder, yang berkembang sebagai akibat penyakit limfoproliferatif, seperti leukemia. Ada tiga kelompok utama perubahan patologis dalam sistem kekebalan:

• ketidakcukupan kuantitatif atau fungsional dari satu atau kaitan kekebalan lainnya, yang mengarah pada pengembangan keadaan imunodefisiensi;
• sebuah pelanggaran dalam pengakuan antigen oleh sistem kekebalan tubuh, yang mengarah pada pengembangan proses autoimun;
• hiperaktif atau "sesat" respon imun, diwujudkan oleh perkembangan penyakit alergi.

Ada skrining (tes tingkat 1) dan metode kualifikasi (tes tingkat 2) imunodiagnostik. Yang pertama ada untuk memperbaiki pelanggaran dalam sistem kekebalan tubuh, yang terakhir - untuk menetapkan mekanisme yang terlibat dalam pelaksanaannya untuk tujuan imunisasi lanjut.

B-Cellular link imunitas

Metode penyaringan

• Penentuan jumlah limfosit B relatif dan absolut dengan menggunakan reaksi imunofluoresensi atau flow cytometry menggunakan antibodi monoklonal terhadap antigen sel B (CD19, CD20, dimana kelompok CD dibedakan). Kandungan B-lymphocyte normal pada orang dewasa: 8-19% dari total jumlah leukosit atau 190-380 sel / μl. Peningkatan kadar B-limfosit terjadi dengan infeksi bakteri dan jamur akut dan kronis, penyakit hati kronis, penyakit jaringan ikat sistemik, leukemia limfositik kronis, myeloma.
• Penentuan konsentrasi imunoglobulin non spesifik (F, M, G, E) dengan imunodifusi radial sederhana, nephelometry atau turbometry, radioimmunoassay atau enzyme immunoassay (ELISA). Norma untuk orang dewasa: imunoglobulin (Ig) 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8.0-17 g / l. Peningkatan konsentrasi imunoglobulin terjadi dengan kondisi patologis yang sama dimana peningkatan kandungan limfosit B terjadi. Mengurangi konsentrasi imunoglobulin terjadi dengan hypogammaglobulinemia kongenital, neoplasma sistem kekebalan tubuh, pengangkatan limpa, kehilangan protein, dengan penyakit ginjal atau usus, pengobatan dengan sitostatika dan imunodepresi.

Menentukan metode

• Penentuan kompleks imun yang bersirkulasi dalam darah dengan presipitasi selektif pada polisilene glikol diikuti dengan pengujian kerapatan spektrofotometri (normal 80-20 UE). Peningkatan kompleks imun yang bersirkulasi adalah karakteristik untuk infeksi bakteri, jamur, virus akut, autoimun, penyakit imunokompleks, serum sickness, reaksi alergi tipe 3;
• Penentuan imunoglobulin spesifik dalam darah dalam kaitannya dengan antigen bakteri dan virus, asam deoksiribonukleat (DNA) pada penyakit autoimun, identifikasi sperma (autoimun infertilitas) dan antibodi protivopochechnyh (pielonefritis dan glomerulonefritis) oleh immunodiffusion radial atau ELISA.
• Penentuan antibodi antisperma pada sperma [MAR-test (reaksi antiglobulin campuran)], normanya negatif.
• Penentuan konsentrasi imunoglobulin dalam urin untuk tujuan diagnosis banding antara pielonefritis dan glomerulonefritis (selektivitas proteinuria).
• Penentuan IgE dalam jus prostat untuk diagnosis prostatitis alergi dengan imunodifusi radial atau ELISA. 
• Studi respon dalam reaksi transformasi blast B-limfosit menjadi mitogen B-sel (mitogen lakonos untuk merangsang reaksi transformasi ledakan limfosit B di hadapan limfosit-T), nilai normatifnya adalah 95-100%.

T-sel link imunitas

Metode penyaringan

• Penentuan jumlah relatif dan mutlak reaksi limfosit matang CD3 T oleh immunofluorescence atau aliran cytofluorometry menggunakan anti-SDZ antibodi monoklonal. Norma untuk orang dewasa adalah 58-76% atau 1100-1700 sel / μl. Penurunan jumlah limfosit-T adalah indikator ketidakcukupan hubungan seluler imunitas. Ini adalah karakteristik dari beberapa immunodeficiencies sekunder dan primer (infeksi bakteri dan virus kronis: TBC, mengakuisisi sindrom defisiensi kekebalan tubuh, kanker, gagal ginjal kronis, trauma, stres, penuaan, kekurangan gizi, pengobatan dengan obat sitotoksik, radiasi pengion). Peningkatan jumlah limfosit-T terjadi dengan latar belakang hiperaktif imunitas atau penyakit limfoproliferatif. Dengan peradangan, jumlah limfosit T pertama meningkat, dan kemudian menurun. Tidak adanya penurunan limfosit-T menunjukkan kronisisasi proses inflamasi.
• Penilaian subpopulasi limfosit.
  • Penentuan jumlah T-helper (antibodi anti-CD4). Biasanya, 36-55% atau 400-1100 sel / μl. Peningkatan jumlah sel ini terjadi pada penyakit autoimun, penyakit Waldenstrom, aktivasi implantasi antigraft; penurunan jumlah sel T-helper terjadi pada bakteri, virus, infeksi kronis protozoa, TBC, sindrom defisiensi imun, keganasan, luka bakar, trauma, kekurangan gizi, penuaan, pengobatan sitostatika, radiasi pengion.
  • Penentuan jumlah penekan-T (antibodi anti-CD4). Biasanya, 17-37% atau 300-700 sel / μl. Kenaikan jumlah penekan T terjadi dengan kondisi yang sama dimana jumlah T-helper menurun, dan penurunannya pada kondisi yang sama, ketika isi T-helper meningkat.
  • Immunoregulatory index CD4 / CD8, pada normalnya 1,5-2,5. Hiperaktif pada tingkat lebih dari 2,5 (penyakit alergi dan autoimun); hipoaktivitas - kurang dari 1,0 (predisposisi terhadap infeksi kronis). Pada permulaan proses peradangan, indeks imunoregulator meningkat, dan saat mereda, ia menormalkan.

Menentukan metode

• Penentuan jumlah pembunuh alami (sel NK) - anti-CD16 dan anti-CD56-antibodi. Norma untuk CD 16-limfosit adalah 6-26%, CD56-9-19%. Peningkatan jumlah sel NK terjadi dengan penolakan terhadap cangkok, penurunan infeksi virus, penyakit onkologis, imunodefisiensi primer dan sekunder, luka bakar, trauma dan stres, pengobatan dengan sitostatika dan paparan radiasi pengion. 
• Penentuan jumlah limfosit-T dengan reseptor interleukin-2 (penanda aktivasi) - antibodi anti-CD25. Normalnya adalah 10-15%. Peningkatan jumlah mereka diamati pada penyakit alergi, penolakan transplantasi, respons terhadap antigen dependen timus pada periode akut infeksi primer, penurunan penyakit yang sama dengan jumlah sel NK menurun.
• Pemeriksaan ekspresi penanda aktivasi - molekul histokompatibilitas HLA-DR kelas II. Ekspresi yang meningkat terjadi pada proses inflamasi, pada pasien dengan hepatitis C, penyakit seliaka, sifilis, infeksi saluran pernapasan akut.
• Evaluasi apoptosis limfosit. Sebuah indikasi kesiapan limfosit apoptosis dapat diidentifikasi dengan ekspresi mereka dari permukaan Fas-receptor (CD95) dalam mitokondria dan bd-2 protoonkogen. Apoptosis dievaluasi dengan pengolahan limfosit dua pewarna fluorescent: iodida propidium, yang mengikat fragmen DNA dan annexin Y, mengikat phosphatidylserine di membran sel muncul di apoptosis awal. Evaluasi hasil dilakukan pada aliran cytofluorimeter. Perhitungan hasilnya didasarkan pada rasio sel yang diwarnai dengan berbagai pewarna. Sel-sel dicemarkan adalah sel yang layak, terkait hanya dengan annexin Y, - tanda-tanda awal apoptosis, dengan propidium iodida dan annexin I - manifestasi akhir dari apoptosis, pewarnaan hanya propidium iodida menunjukkan nekrosis.
• Evaluasi proliferasi limfosit-T secara in vitro.
  • Perubahan blastogenesis sel adalah reaksi dari transformasi blast limfosit. Leukosit diinkubasi dengan mitogen asal tumbuhan (lektin). Phytohemagglutinin yang lebih umum digunakan selama 72 jam, lalu lakukan smear, noda dan hitung jumlah ledakannya! Indeks stimulasi adalah rasio persentase sel yang ditransformasikan dalam percobaan (kultur dengan phytohemagglutinin) terhadap persentase sel yang ditransformasikan dalam kontrol (kultur tanpa phytohemagglutinin). Reaksi ledakan-transformasi limfosit dapat dinilai dengan masuknya label radioaktif (ZN-thymdin) pada sel-sel kultur, karena sintesis DNA meningkat saat membagi sel. Gangguan pada respon proliferatif terjadi baik pada imunodefisiensi primer dan sekunder yang terkait dengan infeksi, penyakit onkologis, insufisiensi ginjal, dan intervensi bedah.
  • Evaluasi studi ini, ekspresi penanda aktivasi (CD25, reseptor transferin ke - CD71) molekul dan MHC kelas II HLA-DR, yang secara substansial tidak hadir pada beristirahat-limfosit T. Limfosit T dirangsang dengan phytohemagglutinin setelah 3 hari ekspresi penanda aktivasi dianalisis dengan imunofluoresensi langsung atau tidak langsung, aliran cytometry menggunakan antibodi monoklonal disekresikan reseptor.
  • Pengukuran jumlah mediator yang disintesis oleh limfosit T yang diaktifkan [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, γ-interferon, dll], oleh radioimmunoassay atau ELISA. Yang terpenting adalah evaluasi konsentrasi y-interferon dan IL-4 sebagai penanda TH dan Th2 dalam supernatan budaya aktif dan di dalam sel. Jika memungkinkan, ini berguna untuk menentukan ekspresi gen untuk sitokin yang sesuai dengan tingkat asam ribonukleat matriks dalam sel penghasil dan intensitas ekspresi reseptor untuk sitokin yang sesuai.
    
• Reaksi penghambatan migrasi limfosit. Sensitized T-limfosit dalam reaksi dengan antigen melepaskan limfokin, termasuk faktor. Menghambat migrasi limfosit. Fenomena penghambatan diamati saat mitogen diperkenalkan ke dalam kultur sel. Evaluasi tingkat inhibisi memungkinkan untuk menilai kemampuan limfosit untuk melepaskan sitokin. Biasanya, frekuensi migrasi, tergantung pada mitogen spesifik, adalah 20-80%.
• Evaluasi sitotoksisitas sel NK. Tentukan kemampuan sel pembunuh alami untuk membunuh sel target dari garis eritromiidoid K-562. Jika sitotoksisitas tergantung pada antibodi dievaluasi, sel target yang dilapisi dengan antibodi IgG digunakan. Sel target diberi label dengan 3H-uridine dan diinkubasi dengan sel efektor. Kematian sel target diperkirakan dari pelepasan label radioaktif ke dalam larutan. Pengurangan sitotoksisitas terjadi dengan neoplasma ganas. Dalam beberapa kasus, bila prognosis keefektifan pengobatan dengan interleukin diperlukan, sitotoksisitas sel NK dievaluasi saat diinkubasi dengan sitokin tertentu.

Investigasi fungsi fagosit

Metode penyaringan

Investigasi penyerapan sel mikroba oleh fagosit (fagositosis partikel lateks, kultur uji staphylococcus, Escherichia coli, atau mikroorganisme yang diisolasi dari pasien). Dengan memusatkan darah heparinisasi, suspensi leukosit diisolasi, serum kelompok darah IV ditambahkan untuk opsonisasi (opsonin adalah protein yang meningkatkan fagositosis). Suspensi mikroba diencerkan, dicampur dengan leukosit dan diinkubasi selama 120 menit, pengambilan sampel untuk analisis setelah 30,90.120 menit setelah dimulainya inkubasi. Dari suspensi leukosit yang dipilih membuat smear. Tentukan indikator fagositosis berikut ini:

• indeks fagositik - persentase sel yang memasuki fagositosis dalam 30 menit dan inkubasi 120 menit; nilai normatif indeks fagositosis (30) 94% indeks fagositik (120) - 92%;
• jumlah fagositik - jumlah bakteri rata-rata yang bersifat intrasel; nilai normatif jumlah fagositik (30) 11%, jumlah fagositik (120) - 9,8%;  
• koefisien jumlah fagositik - jumlah fagositik (30) terhadap jumlah fagositik (120); normal 1,16;
• Indeks bakterisida neutrofil adalah rasio jumlah mikroba yang terbunuh di dalam fagosit dengan jumlah total mikroba yang terangkat; dalam norma 66%.

Menentukan metode

• Investigasi aktivitas bakterial fagosit dalam tes dengan nitrosine tetrazolium (NST) adalah uji NST. Pada leukosit, pewarna nitrat tetrazolium kuning ditambahkan. Bila pewarna diserap oleh neutrofil, proses reduksi terjadi di bawah aksi radikal bebas oksigen, yang berefek biru. Reaksi dilakukan dalam piring 96-well flat-bottomed. Dalam tiga sumur pertama dengan campuran HCT dan leukosit, larutan Hanks (HCT spontan) ditambahkan, pada partikel latex terakhir; diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 25 menit. Hasilnya dibaca pada 540 nm pada pembaca dan dinyatakan dalam unit konvensional. Hitunglah faktor stimulasi (K _st ), sama dengan rasio densitas optik pada sumur yang dirangsang terhadap kerapatan optik rata-rata di sumur tanpa stimulasi. Pada orang sehat, _{HCT spontan} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Investigasi molekul adhesi. Dengan bantuan flow sitofluorimetri, ekspresi antigen permukaan CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ditentukan. Kekebalan kekebalan dengan pelanggaran adhesi dimanifestasikan oleh infeksi kambuhan, penyembuhan luka yang lambat dan tidak adanya nanah pada fokus infeksi.

Investigasi sistem pelengkap

Metode penyaringan

Penentuan aktivitas hemolitik komplemen - studi jalur klasik aktivasi komplemen. Pengenceran serum serum pasien dan orang sehat yang berbeda ditambahkan ke eritrosit domba yang dilapisi antibodi. Unit aktivitas hemolitik diambil sebagai kebalikan dari pengenceran serum, dimana 50% eritrosit dihancurkan. Derajat hemolisis dievaluasi secara fotometrik oleh hasil hemoglobin dalam larutan. Pengurangan aktivitas hemolitik pelengkap diamati pada lupus eritematosus sistemik dengan keterlibatan ginjal, glomerulonefritis akut. Gabungan immunodeficiencies, myasthenia gravis, hepatitis virus, limfoma, meningkat - dengan ikterus obstruktif, tiroiditis Hashimoto. Rematik, rheumatoid arthritis, periarteritis nodular. Dermatomiositis, infark miokard, kolitis ulserativa, sindrom Reiter, asam urat.

Menentukan metode

• Penentuan komponen pelengkap. Penentuan kuantitatif dilakukan dengan metode imunodifusi radial dan nephelometry.
  Penelitian ini tidak informatif, kecuali sifat antigenik komponen komplemen yang berubah.
• Ditemukan bahwa komponen Clq melengkapi meningkatkan fagositosis dan menengahi sitotoksisitas seluler. Penurunannya terjadi pada penyakit kompleks imun, lupus eritematosus sistemik, infeksi purulen dan tumor.
• Komponen C3 berpartisipasi dalam aktivasi jalur pelengkap klasik dan alternatif. Pengurangan konsentrasinya dikaitkan dengan infeksi bakteri dan jamur kronis, adanya kompleks imun sirkulasi atau jaringan.
• Komponen C4 berpartisipasi dalam aktivasi jalur klasik. Pengurangan konsentrasinya dikaitkan dengan aktivasi komplemen berkepanjangan dengan kompleks imun dan penurunan konsentrasi inhibitor C1, yang mengendalikan aktivasi jalur pelengkap klasik. Defisiensi C4 terjadi pada lupus eritematosus sistemik, peningkatan C4 terjadi pada penyakit ginjal, penolakan transplantasi, peradangan akut, dan penyakit saluran cerna.
• C5a adalah fragmen kecil molekul C5, terpisah dari itu sebagai hasil pengaktifan sistem pelengkap. Kenaikan konsentrasinya terjadi pada radang, sepsis, atopik dan penyakit alergi.
• Cl-inhibitor adalah faktor multifungsi. Ini mengendalikan aktivasi komponen pelengkap C1, menghambat aktivitas kallikrein, plasmin dan faktor aktif Hageman, protease Cls dan or. Defisiensi C1-inhibitor menyebabkan angioedema.
• studi pelengkap. Pada serum standar yang kekurangan komponen pelengkap, serum uji ditambahkan dan aktivitas hemolitik komplemen ditentukan. Jika aktivitas hemolitik tidak pulih normal, diyakini bahwa aktivitas komponen pelengkap ini dalam serum uji berkurang.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]